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<title>Microarray immunologico in sospensione</title>
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<div id="wx_article">
<wx:section level="1" title="Microarray immunologico in sospensione" id="wxsec1"><h1 class="pagetitle" id="wx1">Microarray immunologico in sospensione</h1>

<p id="wx2">Il <b id="wx3">microarray immunologico in sospensione</b> è una tecnica che permette l’analisi simultanea di fino a 100 differenti biomolecole (<a href="/wit/Proteine" title="Proteine" wx:linktype="known" wx:pagename="Proteine" wx:page_id="584745" id="wx4">proteine</a>, <a href="/wit/Peptidi" title="Peptidi" wx:linktype="known" wx:pagename="Peptidi" wx:page_id="917889" id="wx5">peptidi</a> o <a href="/wit/Acidi_nucleici" title="Acidi nucleici" wx:linktype="known" wx:pagename="Acidi_nucleici" wx:page_id="97818" id="wx6">acidi nucleici</a>) in un piccolo volume di campioni biologici.</p>

<div id="wx_toc"/>

<a id="Principio_di_funzionamento" name="Principio_di_funzionamento"/>
<wx:section level="2" title="Principio di funzionamento" id="wxsec2"><h2 id="wx7">Principio di funzionamento</h2>

<p id="wx8">La novità introdotta da questo saggio si basa sull'utilizzo di microsfere di polistirene (del diametro di 5,6 µm) a cui viene legato un <a href="/wit/Anticorpo" title="Anticorpo" wx:linktype="known" wx:pagename="Anticorpo" wx:page_id="698638" id="wx9">anticorpo</a> specifico per l'analita che si vuole quantificare. Queste microsfere sono coniugate a 2 fluorocromi in concentrazioni diverse, tali da determinare fino a 100 diverse regioni. Quindi ogni diversa microsfera, determinata da un’unica regione, sarà legata ad un anticorpo per un diverso analita e questo permette la rilevazione di più analiti, fino a 100 in uno stesso campione. L'esecuzione del saggio prevede:</p>

<ul id="wx10">
<li id="wx11">
<p id="wx12">aggiunta di una combinazione delle diverse microsfere nei pozzetti di una apposita piastra per il saggio e lavaggi con una <a href="/wit/Soluzione_tampone" title="Soluzione tampone" wx:linktype="known" wx:pagename="Soluzione_tampone" wx:page_id="91510" id="wx13">soluzione tampone</a>; la piastra usata è costituita da pozzetti con fondo a filtro che consentono il lavaggio tramite aspirazione della soluzione tampone dal basso, in modo che le microsfere non vengano disperse;</p>
</li>

<li id="wx14">
<p id="wx15">aggiunta dei campioni contenenti gli analiti incogniti e lavaggi con la soluzione tampone;</p>
</li>

<li id="wx16">
<p id="wx17">aggiunta di un anticorpo secondario coniugato a <a href="/wit/Biotina" title="Biotina" wx:linktype="known" wx:pagename="Biotina" wx:page_id="49524" id="wx18">biotina</a>, questo anticorpo lega l'analita in un sito diverso rispetto all'anticorpo legato alla microsfera, e relativi lavaggi;</p>
</li>

<li id="wx19">
<p id="wx20">aggiunta di streptavididina coniugata ad un terzo fluoroforo e relativi lavaggi</p>
</li>

<li id="wx21">
<p id="wx22">risospensione delle microsfere in un tampone di lettura.</p>
</li>
</ul>

<a id="La_camera_di_lettura" name="La_camera_di_lettura"/>
</wx:section><wx:section level="2" title="La camera di lettura" id="wxsec3"><h2 id="wx23">La camera di lettura</h2>

<p id="wx24">Lo strumento, basato sulla tecnologia Luminex xMAP, sfrutta lo stesso principio del citofluorimetro per rilevare reazioni che avvengono sulla superficie di microsfere <a href="/wit/Fluorescenti" class="new" title="Fluorescenti" wx:linktype="unknown" wx:pagename="Fluorescenti" id="wx25">fluorescenti</a>. Le microsfere vengono aspirate da un ago e portate nella camere di lettura dove vengono fatte passare una ad una e colpite da 2 <a href="/wit/Laser" title="Laser" wx:linktype="known" wx:pagename="Laser" wx:page_id="1709357" id="wx26">laser</a>. Uno riconosce la regione della microsfera, e quindi il relativo analita riconosciuto dall'anticorpo a lei legato, andando ad eccitare i 2 fluorocromi che la determinano, mentre l'altro laser la quantifica perché eccita il fluoroforo legato sull'anticorpo secondario.</p>

<a id="Applicazioni" name="Applicazioni"/>
</wx:section><wx:section level="2" title="Applicazioni" id="wxsec4"><h2 id="wx27">Applicazioni</h2>

<p id="wx28">Il saggio può essere eseguito su supernatanti (da 12 a 50 μl) di culture cellulari e tessutali, <a href="/wit/Plasma_%28biologia%29" title="Plasma (biologia)" wx:linktype="known" wx:pagename="Plasma_(biologia)" wx:page_id="55052" id="wx29">plasma</a>, <a href="/wit/Siero" title="Siero" wx:linktype="known" wx:pagename="Siero" wx:page_id="152675" id="wx30">siero</a>, fluido interstiziale adiposo, fluido di lavaggio bronco-alveolare, fluido cerebrospinale, fluido da lavaggio nasale, fluido peritoneale e fluido sinoviale, e inoltre in sistemi murini da tessuti di <a href="/wit/Colon" title="Colon" wx:linktype="known" wx:pagename="Colon" wx:page_id="695624" id="wx31">colon</a>, <a href="/wit/Rene" title="Rene" wx:linktype="known" wx:pagename="Rene" wx:page_id="689901" id="wx32">rene</a>, <a href="/wit/Polmone" title="Polmone" wx:linktype="known" wx:pagename="Polmone" wx:page_id="880135" id="wx33">polmone</a>, <a href="/wit/Milza" title="Milza" wx:linktype="known" wx:pagename="Milza" wx:page_id="692804" id="wx34">milza</a> e <a href="/wit/Sistema_nervoso" title="Sistema nervoso" wx:linktype="known" wx:pagename="Sistema_nervoso" wx:page_id="1783948" id="wx35">sistema nervoso</a>. Sono disponibili in commercio dei kit di applicazione di questa metodica per la quantificazione simultanea di <a href="/wit/Citochine" title="Citochine" wx:linktype="known" wx:pagename="Citochine" wx:page_id="427884" id="wx36">citochine</a> e <a href="/wit/Fosfoproteine" class="new" title="Fosfoproteine" wx:linktype="unknown" wx:pagename="Fosfoproteine" id="wx37">fosfoproteine</a> di uomo, topo e ratto. Inoltre le microsfere possono essere coniugate, grazie a semplici reazioni chimiche covalenti e stabili, a proteine, peptidi, anticorpi, <a href="/wit/DNA" title="DNA" wx:linktype="known" wx:pagename="DNA" wx:page_id="659892" id="wx38">DNA</a>, aptameri o anche microrganismi interi, quali <a href="/wit/Virus_%28biologia%29" title="Virus (biologia)" wx:linktype="known" wx:pagename="Virus_(biologia)" wx:page_id="689852" id="wx39">virus</a> o <a href="/wit/Batteri" title="Batteri" wx:linktype="known" wx:pagename="Batteri" wx:page_id="19635" id="wx40">batteri</a>, in modo da essere usate come sistemi aperti.</p>

<a id="Bibliografia" name="Bibliografia"/>
</wx:section><wx:section level="2" title="Bibliografia" id="wxsec5"><h2 id="wx41">Bibliografia</h2>

<ul id="wx42">
<li id="wx43">
<p id="wx44">Wright H et al., Multiplex cytokines profiling of initial therapeutic response in patients with chronic hepatitis C virus infection, Dig Dis Sci 50, 1793-1803 (2005)</p>
</li>

<li id="wx45">
<p id="wx46">Powell C et al., Characterisation of the cytokine inflammatory response in LPS stimulated full-term cord blood, J Perinat Med 32, 440-445 (2004)</p>
</li>

<li id="wx47">
<p id="wx48">Ishizu T et al., Intrathecal activation of the IL-17/IL-8 axis in opticospinal multiple sclerosis, Brain 128, 988-1002 (2005)</p>
</li>

<li id="wx49">
<p id="wx50">Elkord E et al., Human monocyte isolation methods influence cytokines production from in vitro generated dendritic cells, Immunology 114, 204-212 (2005)</p>
</li>
</ul>

<a id="Voci_correlate" name="Voci_correlate"/>
</wx:section><wx:section level="2" title="Voci correlate" id="wxsec6"><h2 id="wx51">Voci correlate</h2>

<ul id="wx52">
<li id="wx53"><a href="/wit/Anticorpo" title="Anticorpo" wx:linktype="known" wx:pagename="Anticorpo" wx:page_id="698638" id="wx54">Anticorpo</a></li>

<li id="wx55"><a href="/wit/Test_immunoenzimatico" title="Test immunoenzimatico" wx:linktype="known" wx:pagename="Test_immunoenzimatico" wx:page_id="386525" id="wx56">Test immunoenzimatico</a></li>

<li id="wx57"><a href="/wit/Microarray" title="Microarray" wx:linktype="known" wx:pagename="Microarray" wx:page_id="482730" id="wx58">microarray</a></li>
</ul>
</wx:section></wx:section></div>
<div id="wx_categorylinks">
<a href="/wit/index.php?title=Speciale:Categories&amp;article=Microarray_immunologico_in_sospensione" title="Speciale:Categories" wx:linktype="known" wx:pagename="Speciale:Categories" id="wx59">Categorie</a>: <span dir="ltr" id="wx60"><a href="/wit/Categoria:Biochimica" title="Categoria:Biochimica" wx:linktype="known" wx:pagename="Categoria:Biochimica" wx:page_id="43154" id="wx61">Biochimica</a></span> | <span dir="ltr" id="wx62"><a href="/wit/Categoria:Tecniche_di_laboratorio" title="Categoria:Tecniche di laboratorio" wx:linktype="known" wx:pagename="Categoria:Tecniche_di_laboratorio" wx:page_id="403519" id="wx63">Tecniche di laboratorio</a></span></div>
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