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 [ INLINE ] by Ars Technica

 Atualizado - 27/10/2003

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 INDICAES

 ESTRUTURA E FUNO DA ZONA PELCIDA

 A zona pelcida  a camada de glicoprotena que envolve o ocito. Acredita-se

 que esta estrutura no celular  produzida pelo ocito e pelas clulas que o

 envolvem durante o desenvolvimento folicular .
 Ela consiste de duas camadas :

 uma camada externa espessa que  facilmente dissolvida durante o AHA ; e uma

 camada interna fina que  mais difcil de penetrar .
 Durante a cultura " in

 vitro " , a zona pelcida fica frgil e perde sua elasticidade devido ao

 processo chamado " zona hardening " .
 Este processo causa um bloqueio para a

 fertilizao para a poliespermia criando um mecanismo para proteger o

 pr-embrio .

 FUNES DA ZONA PELCIDA

 [ INLINE ] A zona pelcida  uma barreira fsica que serve para proteger os

 ocitos e pr-embries de antgenos durante o perodo de pr-implantao ;

 [ INLINE ] A zona pelcida  importante durante a interao do

 ocito / espermatozide por causa dos receptores de espermatozides na superfcie

 do ocito ; a zona com receptores no funcionantes de espermatozides pode

 inibir a ligao do espermatozide e resultar , assim , numa falha de

 fertilizao ( indicao para ICSI ) ;

 [ INLINE ] A zona pelcida de um ocito saudvel previne a penetrao de um

 espermatozide a mais quando um j foi penetrado no oolema ( bloqueio para

 poliespermia ) ; desta maneira , os ocitos fertilizados na ausncia de zona

 pelcida saudvel demonstraram a poliespermia ; e # A zona pelcida preserva a

 estrutura tri-dimensional e integridade do pr-embrio .

 Anormalidades na estrutura e funo do complexo da estrutura glicoprotica pode

 resultar no impedimento da fertilizao , queda da viabilidade do pr-embrio e

 um prognstico pobre de implantao .
 Criando um furo artificial na superfcie

 do ocito antes da implantao ( AHA ) parece facilitar o hatching natural e pode

 efetivar o resgate do pr-embrio com potencial baixo de implantao .

 INDICAES PARA ASSISTED HATCHING

 1 - Zona pelcida altamente espessa

 [ INLINE ] O espessamento da zona pelcida varia durante o desenvolvimento do

 ocito ou pr-embrio .
 O afinamento comea entre a primeira e segunda clivagem ,

 e continua progressivamente durante a formao do blastocisto .
 Na ausncia

 desse afinamento , possivelmente causada pela produo insuficiente de

 Proteases , o pr-embrio pode ficar preso dentro da zona , abolindo

 efetivamente qualquer potencial para implantao .
 Como j descrito , a criao

 de um furo artificial na zona espessa ( > 15mm ) pode favorecer o hatching natural

 e a implantao dos pr-embries .

 2 - Forma anormal da zona pelcida / pr-embrio

 Ocitos e pr-embries com formato oval no so raros .
 Entretanto , a abilidade

 dessas mrulas tornarem-se compactas , e se desenvolverem ao hatching " in

 vitro " , foi mais lenta do que com os embries de forma normal , arredondada .

 Essa forma irregular de pr-embries so usualmente associadas com a zona

 pelcida anormal .
 O AHA pode ajudar a promover um contato apropriado de clula

 para clula , uma compactao e o hatching desses pr-embries anormais .

 3 - Colorao anormal da zona pelcida

 A zona pelcida escura ( marrom ou amarelada ) so algumas vezes observadas " in

 vitro " .
 Nota-se que a zona pelcida de alguns ocitos , particularmente aqueles

 ps-maduros , escurecem e deterioram progressivamente com a cultura prolongada

 ( observao pessoal ) .
 Quando essa caracterstica morfolgica est presente , o

 pr-embrio  considerado um candidato ao AHA .

 4 - Fragmentao citoplasmtica

 Os fragmentos citoplasmticos so componentes da membrana do citoplasma que

 foram expelidos das superfcies dos ocitos fertilizados e blastmeros dos

 pr-embries .
 Os pr-embries com excessiva fragmentao ( > 20 % ) tem uma taxa de

 implantao mais baixa do que aqueles sem fragmentao .
 Acrescentando , o nmero

 de fragmentos pode afetar a compactao e subsequentemente o desenvolvimento do

 blastocisto .
 Analisando os embries durante um perodo de 72 horas , constatou

 que a maioria dos fragmentos citoplasmticos se desenvolveu entre os estgios

 de prnucleo e primeira ou segunda diviso celular .
 Essa fragmentao

 citoplasmtica precoce , pode indicar danos " in vitro " ou anormalidades

 intrnsecas do DNA dos embries .
 A fragmentao que acontece aps a primeira

 clivagem tende a ser menos excessiva e no deve impedir o desenvolvimento

 subsequente do embrio .
 Esses fragmentos se desenvolvem logo antes da diviso

 dos blastmeros , como mltiplas pequenas bolhas na membrana celular .
 Enquanto a

 clivagem se sucede , algumas bolhas se reincorporam nos outros blastmeros , ao

 passo que outras tornam-se verdadeiros fragmentos delimitados .
 Ocasionalmente ,

 blastmeros individuais podem se quebrar em mltiplos fragmentos , o que indica

 morte celular .

 Porque ocorrem os fragmentos ?
 Vrios fatores podem ser responsveis .
 Condies

 de cultivo , competncia citoplasmtica , integridade gentica , cromossomos no

 balanceados e alteraes da cariocinese e citocinese .

 Anlises cromossmicas dos pr-embries fragmentados atravs da FISH (

 Fluorescence " In Situ"Hibrization ) indicaram que mais de 50 % deles so

 anormais , o que pode explicar sua baixa taxa de implantao .
 Entretanto , 

 interessante notar que no existe relao entre a fragmentao citoplasmtica e

 a idade da mulher , como  o caso do aumento de anomalias cromossmicas nas

 mulheres com mais de 40 anos .
 Uma leve fragmentao ( < 10 % )  , usualmente ,

 caracterizada por pequenos fragmentos , podendo incluir componentes do

 corpsculo polar e est geralmente localizada em uma determinada rea .
 Esses

 pr-embries tm uma alta taxa de implantao e o AHA no est indicado .

 Uma fragmentao moderada ( 10 a 20 % ) est associada com blastmeros de

 tamanhos e formas irregulares .
 Se esses fragmentos estiverem localizados numa

 determinada rea , podem causar a morte de um determinado blastmero .
 Esses

 pr-embries podem apresentar fragmentao excessiva durante a cultura

 prolongada .
 O AHA e a remoo de fragmnetos esto indicados nesses pr-embries

 que possuem baixo potencial de implantao .

 Uma fragmentao excessiva ( > 20 % ) correlaciona-se com baixas taxas de

 implantao .
 Muitas mulheres possuem esse tipo de fragmentao em todos os seus

 pr-embries .
 Alguns deles podem ser beneficiados pelo AHA associado com a

 remoo de fragmentos .
 Os pr-embries que possuem mltiplos fragmentos grandes

 e irregulares tm taxa de implantao muito baixa .
 Os fragmentos grandes so

 difceis de distinguir e podem ser diferenciados dos blastmeros clivados

 apenas pela visualizao do ncleo .
  verdade que os blastmeros ficam cada vez

 menores com as sucessivas mitoses .
 Os pr-embries com essas caractersticas

 anormais tm um prognstico pobre para a implantao , devida a sua citocinese

 bloqueada e vitalidade reduzida na cultura .
 Uma remoo agressiva de fragmentos

 pode ser feita nesses casos , contudo os resultados so ruins .

 5 - Embries com morfologia pobre e baixas taxas de crescimento

 Os pr-embries com crescimento lento ( < 6 clulas em 72 horas ) tm boas

 taxas de implantao aps o tratamento com o AHA , comparado com os pr-embries

 no tratados .
 Uma explicao  que o " furo " na ZP pode promover o transporte

 facilitado de nutrientes , o que melhora o " hatching " in vivo .
 Outra tipo de

 pr-embrio que pode se beneficiar com o AHA  aquele que possui blastmeros de

 tamanho e forma irregulares , implicando em uma citocinese anormal , granulao e

 vacuolizao do citoplasma e outras anormalidades visveis ao microscpio

 ptico .

 6 - Idade da paciente

 A idade da paciente est claramente associada com o sucesso da implantao e da

 gravidez .
 A taxa de implantao cai drasticamente em pacientes submetidas  FIV

 aps os 40 anos .
 Por essa razo , o AHA pode ser indicado somente com base na

 idade ( independente da morfologia dos pr-embries ) para pacientes prximas

 ou que esto passando pelos 40 anos .
 Com o passar do tempo os ocitos perdem

 sua habilidade em implantar , devido ao espessamento da ZP ou , tambm , devido a

 fatores endcrinos sistmicos , de modo que todos os pr-embries de pacientes

 mais velhas necessitam do AHA , independente da morfologia .

 No programa da Cornell existe uma tendncia em aplicar o AHA , rotineiramente ,

 em pacientes acima dos 40 anos ( 1/3 a 1/4 das pacientes da Cornell esto com

 40 ou mais anos ) , sendo que a maioria dos seus pr-embries so manipulados

 antes da transferncia .
 A taxa de gravidez clnica / transferncia para essas

 pacientes ( confirmadas por Ultrassonografia ) excede os 35 % .

 OUTRAS INDICAES

 FSH elevado ( > 15 mUI / ml ) no dia 3 do ciclo indica reserva folicular e

 fisiologia ovariana alterados .
 Esse fato pode afetar o ocito e sua ZP no

 interior do folculo .
 Demonstrou-se que essas pacientes so beneficiadas pelo

 AHA com a duplicao de suas taxas de implantao quando comparadas com as

 pacientes no tratadas pelo AHA .

 METODOLOGIA

 As tcnicas envolvendo o uso da soluo cida de Tyrode's ( AT ) com pH de 2,35

 so mais frequentemente aplicadas ao AHA .
 Nesse procedimento , utilizamos uma

 quantidade mnima de soluo acidificada para dissolver uma pequena poro da

 ZP .
 Se a exposio do pr-embrio nessa soluo for breve , no haver efeito

 negativo sobre eles .

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